Evaluation of the antifungal result of oleoresin and essential oil that copaiba (Copaifera multijuga Hayne)


Óleo de Copaifera multijuga Hayne, in natura e together frações foi ~ avaliados quantos às suas atividade fungitóxicas, avançar a ano espécies de cogumelos filamentosos são de gênero Aspergillus e três espécie de leveduras a partir de gênero Candida. Concentrações de óleo resina e de óleo necessário na faixa de 0,08 mg mL-1a 1,6 mg mL-1 ser estar usadas para as análise qualitativa e quantitativas. Together amostras foram lidar sobre discos de papel de 5 mm de diâmetro e distribuídos sobre o bonito Saboraud em placa de Petri, inoculadas abranger esporos no microrganismos e incubadas naquela 28ºC no decorrer 10 dias. Utilizou-se 1 solução com 1,6 mg mL-1 de nitrato de miconazol gostar de controle positivo. Os achados qualitativos mostrar que ministérios óleo resina proposta boa atividade, contudo uma das frações a partir de óleo necessário se mostrou alto efetivo contrário C. Parapsilosis IOC - 2882, A.flavus IOC-3874 e A. Tamarii IOC-187 alcançar halos de inibição de 16,0±1,4 mm, 19,5±2,1 mm e 12,5±3,5 mm, respectivamente. Já a avaliação quantitativa mostrou que 0,3 medicamento mL-1 dá óleo resina inibiu o crescia de A. Flavus e C. Parapsilosis, enquanto que 0,08 mg mL-1 da fração do óleo essencial tem alcançado esta mesma atividade.

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Copaifera multijuga; óleo essencial; atividade antifúngico; Aspergillus; Candida


Copaifera multijuga Hayne oil in natura e its fractions were evaluated as to their fungitoxic activities against five filamentous fungus varieties belonging to a genus Aspergillus and three yeast species of a genus Candida. Oleoresin and essential oil concentrations ranging são de 0.08 mg mL-1 come 1.6 medicamento mL-1 were used para qualitative e quantitative analyses. The samples were put onto 5mm-diameter document discs spread on Sabouraud"s tool in Petri bowl inoculated with spores of a microorganisms and incubated at 28ºC porque o 10 days. Naquela solution comprise 1.6 medicamento mL-1 miconazole nitrate era used as hopeful control. Qualitative results verified that a oleoresin presented boa activity, while naquela fraction of a essential oil era highly effective versus Candida parapsilosis IOC-2882, Aspergillus flavus IOC-3874 and A tamarii IOC-187 com 16.0±1.4 mm, 19.5±2.1 mm e 12.5±3.5 mm inhibition halos, respectively. Ns quantitative evaluation verified that 0.3 medicamento mL-1 oleoresin inhibited ns growth of Aspergillus flavus and Candida parapsilosis, while 0.08 medicamento mL-1 of ns essential oil fraction reached this very same activity.

Copaifera multijuga; vital oil; antifungal activity; Aspergillus; Candida


Avaliação a partir de efeito antifúngico são de óleo resina e do óleo essencial de copaíba (Copaifera multijuga Hayne)

Evaluation of the antifungal result of oleoresin and essential oil of copaiba (Copaifera multijuga Hayne)

Deus, R.J.A* * dedeus
ufpa.br ; Alves, C.N; Arruda, M.S.P

Laboratório de Química, Programa de Pós-graduação em Química, ICEN, Universidade federal do Pará, avenida Augusto Correa, s/n - Guamá, CEP: 66075-110, Belém-Brasil

RESUMO

Óleo de Copaifera multijuga Hayne, in natura e together frações foi ~ avaliados quanto às suas atividades fungitóxicas, frente a ano espécies de cogumelo filamentosos são de gênero Aspergillus e três espécie de leveduras do gênero Candida. Concentrações de óleo resina e de óleo essencial na faixa de 0,08 mg mL-1a 1,6 medicamento mL-1 foram usadas ao as plural qualitativa e quantitativas. As amostras foram lidar sobre discos de departamento de 5 mm de diâmetro e distribuídos sobre o bonito Saboraud em placas de Petri, inoculadas com esporos no microrganismos e incubadas naquela 28ºC durante 10 dias. Utilizou-se ns solução alcançar 1,6 medicamento mL-1 de nitrato de miconazol como controle positivo. Os resultado qualitativos eu mostrei que ministérios óleo resina presente boa atividade, contudo uma do frações dá óleo necessário se mostrou alto efetivo anti C. Parapsilosis IOC - 2882, A.flavus IOC-3874 e A. Tamarii IOC-187 abranger halos de inibição de 16,0±1,4 mm, 19,5±2,1 mm e 12,5±3,5 mm, respectivamente. Já a obrigado quantitativa exposição que 0,3 mg mL-1 dá óleo resina inibiu o crescente de A. Flavus e C. Parapsilosis, devido a que 0,08 mg mL-1 da fração do óleo essencial atingiram esta mesma atividade.

Palavra-chave: Copaifera multijuga, petróleo essencial, trabalhar antifúngico, Aspergillus, Candida

ABTRACT

Copaifera multijuga Hayne oil in natura and its fractions were evaluated regarding their fungitoxic activities against five filamentous fungus varieties belonging to a genus Aspergillus and three yeast varieties of a genus Candida. Oleoresin and essential oil concentration ranging from 0.08 mg mL-1 come 1.6 medicamento mL-1 to be used for qualitative e quantitative analyses. The samples were placed onto 5mm-diameter file discs spread on Sabouraud"s tool in Petri bowl inoculated com spores of ns microorganisms and incubated in ~ 28ºC ao 10 days. Der solution comprise 1.6 medicamento mL-1 miconazole nitrate era used as hopeful control. Qualitative results showed that ns oleoresin presented good activity, while naquela fraction of a essential oil foi ~ highly effective against Candida parapsilosis IOC-2882, Aspergillus flavus IOC-3874 e A tamarii IOC-187 with 16.0±1.4 mm, 19.5±2.1 mm and 12.5±3.5 mm inhibition halos, respectively. A quantitative evaluation showed that 0.3 mg mL-1 oleoresin inhibited a growth the Aspergillus flavus and Candida parapsilosis, while 0.08 mg mL-1 of ns essential oil fraction reached this very same activity.

Key words: Copaifera multijuga, important oil, antifungal activity, Aspergillus, Candida

INTRODUÇÃO

diversas doenças microbianas de fonte bacteriana, viral alternativa fúngica são relatado na literatura. Em muitos casos, os responsáveis por infecções adquirem resistência ~ por medicamento administrado, e por aquela motivo grande número de antibióticos tenho sido desenvolvido (Kubo et al., 1993; Koshi & Cherian, 1995). Paralelamente, a procurar de antimicrobianos de origem inverno que apresentem atividade sobre compridas espectro de microbiana e o que possam estar usados como em vez de substituir aos antibióticos convencional tem despertado o interessa da classe científica, sobretudo fazendo moléculas de a fonte vegetal, já que as árvore possuem grande potencial em sintetizar substancias químicas abranger estruturas diversificadas, gostar sistema de defesa contra agentes patogênicos (Rodrigues et al., 1997). Ao serem efetivas como revendedor autorizado antimicrobianos, as substâncias precisam está dentro produzidas e acumulado em concentrações suficientes nos órgãos e local intracelulares, uma vez são efetivas em organização vegetais poderão está dentro efetivas em tecidos animal (Santos, 1998). 1 assunto vem ao reunir da investigação sistemática cerca de os lado microbiológicos, profiláticos e terapêuticos ns infecções oportunistas (Rodrigues et al., 1997). Dentro deste assunto, ressaltam-se as infecções fúngicas que correspondem até ~ 10% do bruta de casos, abranger predomínio de microrganismo ligação aos gênero Candida e Aspergillus (Koshi & Cherian, 1995; Mylonakis & Calderwood, 2001).

O ater tratamento porque o a contágio fúngica denominações a antibioticoterapia endovenosa alongar (Verghese et al., 1998; Menesalvas & Bouza, 1998). O curar específico de doenças causadas por fungos excluir prolongado em função da familiar diagnóstica adicionar do eu imploro seu perdão às infecções causadas pela bactérias; fato naquela que fronteira o armando antimicrobiano anti este tipo de patógeno. Isto modo, a busca de antimicrobianos de a fonte vegetal se apresenta alcançar grande potencial em efetua das célula vegetais reagirem anti patógenos, além do mais possam ser acrescido eficientes no tratamento dessas infecções micóticas e menos tóxicas aos pacientes (Recio et al., 1989; Farnsworth, 1996).

Entre as variedade famílias de árvore estudadas, destaca-se der Leguminosae que isso é divida em n ° 3 subfamílias, Caesalpinoideae, Mimosoideae e Papilionoideae (ou Faboideae) (Judd et al., 1999). Nisso classificação, destaca-se o gênero Copaifera, presença à subfamília Caesalpinoideae (Andrade júnior et al., 2000; Veiga júnior & Pinto, 2002), gênero que apresenta 16 sino ocorrentes no brasil das quais só 4 aparecer na região Norte, fex o óleo de copaíba é largamente comercializado e utilizado na medicina popular (Cascon & Gilbert, 2000).

O óleo de copaíba é constitutivo de dois grupos de substâncias distintas, solúveis entrada si, existência um constitutivo de substâncias voláteis, correspondendo a prazo 90% de massa do óleo resina e outro grupo constituído de substâncias algum voláteis, resinosa de cores caramelo que começar a ser decomposta à temperatura próximo de 300ºC, e que corresponde a 10% da massa bruta do óleo resina (Veiga Junior, 1997).

Neste trabalho, descrevem-se as avalie dos potenciais antifúngicos a partir de óleo resina e a partir de óleo necessário de copaíba, comparando-se os níveis de fungitoxidade dos óleos naturais abranger o nitrato de miconazol, um fungicida comercial, frente a 5 espécies de fungos filamentos são de gênero Aspergillus e 3 espécie de leveduras do gênero Candida.

MATERIAL E MÉTODO

Coleta dá óleo resina de copaíba

O petróleo resina de copaíba foi coletado durante município de Santarém ligação à mesorregião do baixa Amazonas e à microrregião Santarém, situado à latitude 02º25"30"S, longitude 54º42"50"W. A espécie foi identificada gostar Copaifera multijuga Hayne apresentando registro de exsicata de consistência INPA-82418 britânico no herbário a partir de Instituto nacional de pesquisas da Amazônia (INPA).

Para obtenção do óleo, aquisição usado trado handmade de 7/8 polegada de diâmetro e 1,0 m de comprimento. Der árvore foi perfurada à altitude de 60 naquela 70 cm são de chão, até o central do caule (20 naquela 50 cm de profundidade enquanto tronco, de acordo com o diâmetro da árvore), alcançar pequeno declive para escoamento. Ns mangueira de 3/4 de polegada obtivermos colocada boa ajustada no orifício, e enquanto outro extremo do tubo aquisição colocado frasco de vidro âmbar de uma L. Depois de ~ a colheita, ministérios furo adquirindo tampado alcançar uma sino de rolha de floresta ou com argila e der árvore obtivermos preservada recebendo curativo. 1 método produz pequeno óleo, tem alto custos operacionais, contudo preserva naquela árvore, porque o colheitas futuro e é ecologicamente adequado (Azevedo, 2004).

Obtenção a partir de linhagens de fungos utilizados nos ensaios

As raça de microrganismos do espécies Aspergillus flavus (IOC-3974), Aspergillus niger (IOC-200), Aspergillus tamarii (IOC-186), Aspergillus tamarii (IOC-187), Aspergillus terreus (IOC-217), Candida guilliermondii (IOC-2889), Candida tropicallis (IOC-3610) e Candida parapsilosis (IOC-2882), empregadas neste trabalhar foram obtidas são de Laboratório de coleção de Fungos são de Instituto Osvaldo a cruz (Fiocruz-RJ).

Meio de cultivo e cultura dos microrganismos

O bonito de cultivo utilizado para 1 experimento adquirindo o ASD (Ágar Sabouraud-Dextrose). Em cada discos de Petri foram adicionar 20 mL de meio (Midley et al., 1998; Mendes-Giannini & Melhem, 2001; Minami, 2003). O método de indagação de trabalhar fungitóxico aplicado neste trabalhar foi adaptação e de acordo com um protocolo de execução a partir de descrito por Lima et al.(2006).

Obtenção a partir de óleo essencial

100 mL do óleo resina de copaíba ser estar submetidos à destilação em balão de elevar redondo de 250 mL, no qual foram adaptação a coluna de destilação de 30 cm de comprimento por 2 centimeter de diâmetro e condensador de 40 cm de comprimento abranger 1 cm de diâmetro de serpentina no qual obtivermos acoplada refrigeração abranger circulação de água abranger vazão de 4 L através min a temperatura de 10ºC. O procedimento aquisição realizado durante 5 h, obtendo-se 75 mL de destilado, os quais ser estar transferidos para frasco de copo de cores âmbar, hermeticamente conclusão e armazenado em temperamento de 5ºC porque o uso traseira (Veiga pequena & Pinto, 2002).

Preparo são de inóculo

O inoculo dos muitos microrganismos descritos foram preparados através dos do cultivo em tubo de ensaio de 15 cm x 1,5 cm alcançar tampa, contendo 5 mL de bonito de lavoura na posição magro e incubados naquela 28ºC, enquanto 7 dias. Depois de ~ este período, adicionou-se 3 mL de água estéril alcançar subsequente agitação em Vortex (QUIMIS-220A) no decorrer 1 min. As suspensões de esporos (na limite de 106 a 108 esporos mm-1) passou a ser transferidas porque o frascos alcançar tampas e preparado sob refrigeração a temperatura de 10ºC para uso posterior gostar inóculo (Naghetini, 2006).

Análise a partir de óleo de copaíba através da CG/EM

CG/EM: o óleo resina e o necessário foram analisados através dos Cromatografia de gases (Focus GC) acoplado naquela um Espectrometro de massas em sistema Thermo DSQII, abranger coluna capilar de sílica OV-5 (30 m x 0,25 mm; 0,25 µm de espessura dá filme). A programação de temperatura foi de 60ºC-240ºC (3ºC min-1); He adquirindo utilizado como gás de arraste der uma rapidez linear de 32 centimeter s-1, medidas der 100ºC. Der injeção obtivermos do modelo "splitless"; alcançar volume de 0,1 µL de uma solução de 2 µL a partir de óleo em 1000 µL de hexano (Luz et al., 1981; santos et al., 1998; Adams, 2001).

Os espectros de massas ser estar obtidos através dos impacto eletrônico a 70 eV alcançar temperatura da fonte de íons naquela 200ºC. Der identificação aquisição realizada pela comparação de cromatograma, catálogo de retenção alternativamente índice de Kovatz alcançar dados da literatura (Luz et al., 1981; santos et al., 1998; Adams, 2001).

Determinação qualitativa da atividade antifúngica a partir de óleo resina e do óleo necessário de copaíba.

Aplicando a técnica de trabalhar Sobre classe Microbiana (ASCM) adaptar da habilidade de difusão em Agar, ferum um swab obtivermos embebido na suspensão de esporos efetuando-se ministérios espalhamento a partir de microrganismo sobre a superfície são de meio sólido, de modo a se importar um tapete fúngico (Apisariyakul et al., 1995; rio et al., 1998; Brandão, 2004). Logo após a inoculação passou a ser dispostos, acima de o bonito de cultura, 6 placa de departamentos de filtro whatman nº 1 com diâmetro de 5 mm. Os disco 1, 2 e 3 continham 2 µL de óleo resina, cada. Os disco 4 e 5 continham 2 µL de soluções propaganda de miconazol naquela concentrações de 1,6 medicamento mL-1. Emprego disco 6 continha apenas água destilada. Procedimento idêntico aquisição realizado porque o cada microrganismo e repetido para ministérios óleo essencial. As placas passou a ser incubadas der 28ºC no decorrer 10 dias e observadas naquela cada 24 hora (Lima et al., 2006).

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Determinação quantitativa da trabalhar antimicrobiana a partir de óleo resina e do óleo necessário de copaíba

Em canos de ensaio estéreis de 12 centimeter x 1,5 centimeter foram adicionar 500 µL de Tween-80 e 5 mL de água desionizada, efetuando-se naquela homogeneização da mistura através agitação manual. A seguir, ser estar transferidas quantidade programadas de óleo resina alternativa óleo essencial de copaíba a fim de se compreendo suspensões nas concentrações de: 1,6 mg mL-1, 1,4 mg mL-1, 1,3 mg mL-1, 1,1 medicamento mL-1, 0,9 mg mL-1, 0,8 mg mL-1, 0,6 mg mL-1, 0,5 mg mL-1, 0,3 medicamento mL-1, 0,1 mg mL-1 e 0,08 mg mL-1. Der partir destes suspensões foi ~ retiradas alíquotas de 2 µL e inoculadas de acordo abranger o procedimento anterior. As placas foi ~ incubadas no decorrer 10 dias naquela 28ºC e observada a formação dos halos naquela cada 24 h. Os ensaios foram realizados em triplicata (Lima et al., 2006).

RESULTADO E DISCUSSÃO

Avaliação a partir de efeito fungitóxico

Quanto ~ por efeitos fungitóxicos são de óleo resina e são de óleo essencial de Copaífera multijuga Hayne, sobre a germinação de esporos das tribos de A. Flavus, A. Niger, A. Tamarii, A. Tamarii, A. Terreus, e nas divisões das células de C. Guilliermondii, C. Tropicallis e C. Parapsilosis, observou-se der formação de tapete fúngico contínuo sobre todos as variedade sendo visualizada der formação de halos em prateleira dos discos de papel contendo, tanto o óleo essencial quanto o óleo resina. Os resultado foram comparados alcançar o nitrato de miconazol fazendo mesmas doença que together amostras, abranger concentração mínimo de 1,6 mg mL-1, emprego que correspondente a 32 µg de óleo essencial através dos disco de papel. Nisso estudo, observou-se que emprego método freqüentemente utilizado para avaliar a trabalhar de óleos e extratos vegetais denominada o de difusivo em disco. Porém, isto método denominações padronizado para ele NCCL (National Committee ao Clinical laboratory Standards) e desenvolveu para analisar revendedor autorizado antimicrobianos (Nascimento et al., 2007).

O aur formado ~ por redor da amostra contendo o óleo resina se formou abranger um diâmetro mínimo de 7 mm, alternativamente seja 30% marginalmente que ministérios halo formado alcançar a amostra contendo miconazol. Este resultado ressalta der presença da atividade em 8 dia para as Candida, porém a partir deste prazo a trabalhar declinou havendo o avançar microbiano sobre naquela zona inibida. Por 1 motivo, e abranger base nas observações, o óleo resina dental espécie apresentou apenas um atividade fungistática porque o as leveduras. Já ao nos cogumelo filamentosos, os halos de inibição passou a ser maiores presente que isto microrganismos são guardada tolerantes ao óleo resina dá que together leveduras (Tabela 1).